胚胎玻璃化冷凍解凍植入之懷孕率比 新鮮胚胎植入之懷孕率還高

本篇指出，將所有第3天胚胎玻璃化冷凍後於往後週期再解凍植入之懷孕率(53%)比不冷凍直接將第3天新鮮胚胎植入之懷孕率(33%)還高。
冷凍解凍胚胎存活率為98%。
新鮮週期之高E2值可能抑制LH及子宮內膜之接受度。

http://xbyx.xysm.net/xbwk/fileup/PDF/201007673.pdf

原核移殖，冷凍與電融合後孤雌生殖分裂

將原核(germinal vesicle )之細胞核取出至移入去核之卵細胞中 再予以電融合後施行孤雌生殖分裂。
原核之細胞核亦可玻璃化冷凍儲存於去細胞質之中空透明帶(Zona pellucidae)中。
經冷凍解凍之原核可達到類似新鮮原核之生殖分裂。

http://www.jstage.jst.go.jp/article/jrd/57/3/335/_pdf

胚葉細胞可用於生殖細胞之培養與再生

胚葉細胞可用於生殖細胞之培養與再生
胚葉細胞移植入囊胚細胞之生殖細胞脊處以進一步分化為生殖細胞
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21302258

玻璃化冷凍法應用於血球細胞之保存

玻璃化冷凍法可應用於血球細胞之保存
應用微滴噴灑技術 可以玻璃化冷凍法有效保存血球細胞


http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3055869/?tool=pubmed

子宮內膜之環境對維持胚胎基因穩定性有相當作用

子宮內膜之環境對維持胚胎基因之穩定性亦有相當作用

解凍後卵子使用IVF與使用ICSI 卵子受孕率相近


http://www.plosone.org/article/info%3Adoi%2F10.1371%2Fjournal.pone.0021597

卵巢組織抽取原始濾泡以冷凍培養

癌症病患切取卵巢組織 & 自卵巢抽取出原始濾泡
經24-48小時IVM培養後予以冷凍
取出卵子中82%是GV, 17%是MI, 1%是MII卵子
IVM培養液中含有75 mIU/ml FSH & 75 mIU/ml LH
月經周期&是否吃避孕藥對於IVM卵子取出率並無影響
最終可培養出30%之成熟卵子
http://www.rbej.com/content/9/1/150

第3天或第5天胚胎植入累積懷孕率統計結果並無差別

第3天或第5天胚胎植入累積懷孕率統計結果並無差別，其選擇性在於:  臨床醫師判斷 病人胚胎數量 第3天品質狀況 實驗室培養環境之穩定性 本研究中亦顯示第3天或第5天冷凍解凍胚胎累積懷孕率統計結果並無明顯差別 http://www.rbej.com/content/9/1/60

封閉式麥管玻璃化冷凍儲存胚胎與傳統玻璃化冷凍方法類似之存活率類似

使用封閉式麥管方式玻璃化冷凍儲存胚胎之方法提供與傳統玻璃化冷凍方法類似之存活率，同時其更簡便更容易操作學習
http://www.jstage.jst.go.jp/article/jrd/57/4/437/_pdf

玻璃化冷凍法比慢速冷凍法更能提高不成熟卵子之存活率與受孕率

玻璃化冷凍法比傳統慢速冷凍法更能提高不成熟卵子之存活率與受孕率
不成熟卵子比成熟卵子更能抵抗冷凍過程對細包染色體，紡垂絲與微小管之傷害
http://www.rbej.com/content/pdf/1477-7827-9-156.pdf

玻尿酸篩選精蟲顯微注射(HA-ICSI)可提高胚胎品質與著床率

使用玻尿酸篩選精蟲&精蟲顯微注射(HA-ICSI)

比較

傳統PVP篩選精蟲&精蟲顯微注射(PVP-ICSI)

可提高之胚胎品質與著床率

swim-up精蟲分離法可減少精蟲染色體異常及精蟲不成熟之比率

精蟲分離法中常用的上游法(swim-up)
可減少精蟲染色體異常之機率及精蟲不成熟之比率

http://humrep.oxfordjournals.org/content/18/7/1481.long

使用PICSI(玻尿酸)挑選精蟲可挑選出DNA較正常之精蟲進行ICSI 而提高胚胎之正常率與著床率

與玻尿酸結合之精蟲DNA完整性較高

圍繞玻尿酸(PICSI)之精重顯示99%DNA正常完整性(綠色)

使用PICSI挑選精蟲可挑選出DNA較正常之精蟲進行ICSI 而提高胚胎之正常率與著床率
http://www.andrologyjournal.org/cgi/content/full/31/6/566

精蟲穿透檢驗(SPA)與IVF多重受精有關

精蟲穿透檢驗(sperm penetration assay, SPA): 運用倉鼠hamster卵子與精蟲培養看精蟲穿透卵子之比例
SPA之正常與否與精卵體外受孕(IVF)是否多重受精有關
正常SPA之病患亦較異常SPA之病患懷孕率為高，流產率為低

卵巢功能衰退之高齡病患補充DHEA可明顯提高卵子胚胎數量及提高懷孕率

研究顯示，針對卵巢功能衰退之高齡病患，補充DHEA可明顯提高卵子與胚胎數量
進而提高累積懷孕率

(these data suggest that DHEA supplementation may be effective in improving pregnancy chances in women with DOR. )

試管嬰兒體外培養過程污染之可能原因為精液造成之感染

試管嬰兒體外培養中，造成培養過程污染之可能原因為精液造成之感染

以 Percoll 離心之方式分離精蟲並無法完全防止感染之發生

柔沛(Finasteride)可能造成精蟲DNA受損

柔沛(Finasteride)可能造成精蟲DNA受損，DNA fragmentation index上升，進而造成精蟲受孕率下降
停止服用柔沛，精蟲DNA受損情況逐漸改善

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21292254

柔沛(Finasteride)造成精蟲數量，濃度，容量，活動力下降

柔沛 (學名為Finasteride)用於治療男性雄性禿，每天口服一毫克，



柔沛副作用包括性欲下降、勃起障礙及射精障礙等，停藥後副作用消失。



柔沛是一種5α還原脢抑制劑(5α-reductase inhibitor)，可減少二氫睪固酮（dihydrotestosterone, ＤＨＴ）產生，ＤＨＴ太多，毛囊會萎縮而掉髮。


本研究顯示: 柔沛(Finasteride)造成精蟲數量，濃度，容量，活動力下降，但對精蟲外型無明顯影響


值得注意的是長期服用柔沛之病患，停藥後2年後，仍有相當比例病患之精蟲品質無法完全恢復服藥前精蟲之品質

http://jcem.endojournals.org/content/92/5/1659.long

Kitazato vitrification 教學

Kitazato vitrification protocol:
Embryo vitrificaiton: http://www.kitazato-biopharma.com/cryotop/protocol_embryo.html
Oocyte vitrification: http://www.kitazato-biopharma.com/cryotop/protocol_oocyte.html

microtubules與cytoskeleton機能異常與卵子細胞老化有關

A: mouse
B: human

oocyte成熟歷經
prophase (germinal vesicle stage)
Meiosis I (MI)
Meiosis II (MII, 排出第一極體)
Fertilization (受孕, 排出第二極體)


紡錘體(spindle)之移動仰賴細胞質內微小管(microtubules)與細胞骨架(cytoskeleton)之正常運作

於MII階段, microtubules與cytoskeleton將spindle固定於第一極體旁之細胞膜

microtubules與cytoskeleton機能異常與卵子細胞老化有關

紡錘體出現較多在打完破卵針後38-39小時及紡錘體出現後再施打ICSI可得到較高之胚胎受孕率

http://humrep.oxfordjournals.org/content/19/3/649.long
本篇提出紡錘體出現的時間約較多在打完破卵針後38-39小時
polscope(偏光顯微鏡)比傳統觀查第一極體之排出更能準確評估卵子之成熟性
polscope(偏光顯微鏡)可避免精蟲顯微注射(ICSI)傷害紡垂體
紡錘體出現後再施打ICSI可得到較高之胚胎受孕率
同時為避免精蟲顯微注射(ICSI)傷害紡垂體，作者是出提出是否考慮將ICSI延至打完破卵針後38-42小時

HIV(愛滋)病毒可經由精蟲垂直傳染至授精的卵子細胞中

本研究顯示HIV(愛滋)病毒可經由精蟲垂直傳染至授精的卵子細胞中
使用人類HIV精蟲可受孕傳染HIV病毒至倉鼠卵細胞中並以Fluorescence In situ Hybridization (FISH)偵測其表現(Fig A,C)


http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3237474/?tool=pubmed

精蟲螢光染色DNA檢驗(Sperm DNA Fragmentation Assay)

http://www.elcaminourology.com/files/SDFA.pdf

Sperm DNA Fragmentation Assay (SDFA™)檢查
可檢驗不正常精蟲
高達20%男性顯示不正常SDFA精蟲
綠色marker顯示正常 DNA精蟲
橘色marker顯示不正常DNA片段精蟲

One method to test for broken DNA (fragmentation) inside the sperm is to use the fluorescent dye acridine orange to paint sperm with normal DNA green and those with broken DNA a bright orange-red color. The photo on the right shows that routine microscopic evaluation cannot show the difference and that the dye is necessary to expose sperm with broken DNA.

http://lomalindahealth.org/health-care/our-services/fertility/conditions-and-treatments/andrology-tour.page

eosin‐nigrosin染色法可簡單有效評估精蟲存活

本研究介紹簡單有效評估精蟲活動能力之方法: 單一步驟eosin‐nigrosin染色法
eosin‐nigrosin組成為: 0.67% eosin + 10% nigrosin 
染色時間為30 s
其評估精蟲存活律之準確率高達90%

Sperm undergo a maturation process to tightly pack the DNA inside the head and incomplete packing leads to infertility. Mature sperm can be distinguished from immature sperm using the acidic aniline blue eosin stain. Immature sperm are stained dark blue in contrast to the red mature sperm. The two colors can be explained by the difference in the type of amino acids found in the mature versus the immature sperm.








http://lomalindahealth.org/health-care/our-services/fertility/conditions-and-treatments/andrology-tour.page

玻尿酸結合測試與精蟲穿透測試並無明顯關聯

研究顯示玻尿酸結合測試 Hyaluronan binding assay (HBA) 與精蟲穿透測試sperm penetration assay (SPA)並無明顯關聯‧

HBA與SPA應用於男性不孕症各有其專屬性，並無法個別取代

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2868308/

hyaluronic acid binding 與傳統ICSI之比較

1. Hyaluronic acid binding 可篩選出品質較佳之精蟲, 包括較佳之精蟲蛋白組成，較少的DNA缺損 及外型較正常, 較高之受孕率
2. 但著床率及懷孕率與傳統ICSI並無明顯差異

sperm penetration assay (SPA)精蟲穿透測試

將精蟲置於倉鼠卵子中
經過12小時培養
觀察精蟲有無穿透卵子
>10% 正常
<10% 異常
異常不代表精蟲無法穿越人類卵子細胞

The capacity of each sperm to penetrate the egg membrane and unpack the tightly-coiled DNA found in its head can be assessed with the SPA or sperm penetration assay. Inactive thawed hamster eggs are used in this assay. The number of decondensed sperm heads in each egg is counted as shown in this photo on the left (arrows at 2 of the many heads). The DNA in each head is visible as a green circle under fluorescence microscopy shown on the right. Patients with low egg penetration may need sperm injection during IVF to overcome penetration problems.

http://lomalindahealth.org/health-care/our-services/fertility/conditions-and-treatments/andrology-tour.page

Elonva與傳統排卵針之懷孕率相同

新一代長效誘導排卵針Corifollitropin alfa (Elonva®)
於月經第2天施打，約可持續作用9天後，約再施打2天短效傳統排卵針後可達卵泡成熟及取卵
本篇指出Elonva與傳統排卵針之懷孕率相同‧

cryoloop冷凍之使用方法

http://humrep.oxfordjournals.org/content/16/9/1965.full
本篇詳列cryoloop冷凍之使用方法
其cryoprotectant 濃度略高於人類使用之抗凍劑
其balance timing 亦較短
本篇發表於2004年是目前發展成熟的cryotop方法的前身

雷射輔助精蟲顯微注射並不顯著優於傳統精蟲顯微注射

1. 雷射輔助精蟲顯微注射: 先以雷射把中空透明帶打出一個洞再施行精蟲顯微注射(ICSI)

2. 優點: 減少卵子在ICSI過程之擠壓變形傷害

3. 缺點: 暴露時間較長，中空透明帶打出一個洞可能造成中空透明帶對卵子保護性出現缺口

4. 本研究顯示雷射輔助精蟲顯微注射並不顯著優於傳統精蟲顯微注射

5. 雷射輔助精蟲顯微注射可能只對特殊卵子(過熟，老化，難以穿透，過脆卵子，反覆失敗之ICSI患者)有幫助，對一般卵子ICSI並無特殊益處

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1550249/?tool=pmcentrez

Polscope可偵測避免ICSI傷害紡錘體

   

Polscope: 

1. 原本使用於複製動物上，可偵測紡錘體位置 藉以去除卵子細胞核及染色體

2. 傳統精蟲顯微注射(ICSI)是根據極體(polar body,PN)判斷紡錘體可能位置

3. 研究顯示 高達2/3的紡錘體並不緊臨PN

4. 使用Polscope可偵測出紡錘體位置 避免ICSI過程傷害卵子紡錘體

5. 使用Polscope可提高受孕胚胎之品質達1/3以上