卵子極體與meiotic spindle角度過大施行ICSI後預後不佳

以Polscope觀察，
卵子第一 極體(1st PB) 與 meiotic spindle 角度過大(>90度)
卵子施行ICSI後預後不佳




http://humrep.oxfordjournals.org/content/18/6/1289.full

誘導排卵施打LH對一般試管嬰兒並無明顯助益

誘導排卵晚期施打LH對一般試管嬰兒懷孕率並無明顯助益

誘導排卵施打LH可能只對特定病患(e.g.高齡)有益‧

http://humrep.oxfordjournals.org/content/21/1/90.full

卵子內空泡成因為smooth endoplasmic reticulum clusters

MII卵子內有空泡，其成因為smooth endoplasmic reticulum clusters

過高之E2可能是其形成原因

MII卵子內有空泡,其形成胚胎品質較差，流產率較高

http://humrep.oxfordjournals.org/content/19/7/1591.abstract?ijkey=fd39c96c2a44b24c217b8a0a4d7c650ebd3aa791&keytype2=tf_ipsecsha

細胞質中央顆粒之卵子ICSI後預後不佳

細胞質中央顆粒之卵子施行ICSI後胚胎預後不佳
染色體異常率>50%








http://humrep.oxfordjournals.org/content/15/11/2390.abstract?ijkey=0423782f09568b2fc6ab5f5fdae33b1c6e288270&keytype2=tf_ipsecsha

ICSI後胚胎有 injection funnel 預後較差

ICSI過程，卵細胞質過度黏稠之ICSI結果較不佳
胚胎著床率較低
injection funnel: ICSI完後2-3min仍具 funnel
ICSI後胚胎有 injection funnel 預後較差


injection funnel 代表卵細胞質結構有問題

http://humrep.oxfordjournals.org/content/18/6/1294.full

細胞質內空泡或中央異常顆粒形成胚胎後冷凍保存之存活率較低

細胞質內有空泡或細胞中央異常顆粒狀細胞質之卵細胞形成胚胎後冷凍保存之存活率較低

細胞質內空泡常為smooth endoplasmic reticulum clusters (SERC)之形成
細胞中央異常顆粒狀細胞質為organelle clustering之形成


http://humrep.oxfordjournals.org/content/23/8/1778.full

4-cell含少量碎片之胚胎(4-B)優於2-cell不含碎片之胚胎(2A)

IVF後48h,
4-cell含少量碎片之胚胎(4-B)優於2-cell不含碎片之胚胎(2A)


少量碎片(<10%)並不影響胚胎之著床率

http://humrep.oxfordjournals.org/content/12/7/1545.full.pdf+html

用針頭穿刺卵巢組織玻璃化冷凍保存可達80%保存率

使用針頭穿刺卵巢組織，進一步玻璃化冷凍保存卵巢組織
可達不錯效果，保存率達80%



http://humrep.oxfordjournals.org/content/23/10/2256.full

中空透明帶厚度大於22 μm 可能會下降IVF受孕率

zona pellucida (ZP) 中空透明帶
厚度:  10 to 31 μm

平均厚度: 17.5 μm. 

厚度>22 μm 可能會下降IVF受孕率

http://humrep.oxfordjournals.org/content/10/5/1189.abstract?ijkey=e1cb6657c77179653b82ff39237ff724046ccbf1&keytype2=tf_ipsecsha

睪丸副睪取精(PESA, MESA,TESE)細節

【副睪丸精子抽取PESAor MESA】

1.     經皮副睪丸精子抽取術（Percutaneous Epididymal sperm Aspiration，PESA）：以局部麻醉實施。手術時不需要打開陰囊，以21-gauge蝴蝶針，接一支20ml針筒，以兩只捏住副睪丸，穿刺進入副睪丸頭部，回抽多次直到有足夠的精子為止，配合超音波的導引可以增加抽取的成功率。PESA的優點是簡單，不需切開陰囊，但缺點是獲取精子的可靠度較低，約有10~20％的失敗率，但缺點是其抽取的精子量較少，而且易受血液污染。抽取的成功率低於切開式取精法(MESA)。而且收集到的精子常不足冷凍保存。因此衛了有較好的效益建議採用MESA。

第一極體之外型與碎片與ICSI懷孕率有關

第一極體之外型與碎片與ICSI懷孕率有關

卵子細胞質與ZP與ICSI懷孕率無關

http://humrep.oxfordjournals.org/content/15/2/427.full

卵子外觀與ICSI結果無明顯相關

卵子外觀與ICSI結果無明顯相關

卵子外觀指標如下:
卵子外型
ZP (dark)
perivitelline space (大space)
細胞質(dark, granular, refractile body)

http://humrep.oxfordjournals.org/content/13/12/3431.full.pdf+html

3項指標(first polar body, perivitelline space, cytoplasmic inclusions)預估ICSI成功率

3項指標(first polar body, perivitelline space, cytoplasmic inclusions)
預估卵子品質與ICSI成功率


3項指標:
first polar body: intact 優於fragment
size of perivitelline space: 小space優於大space
cytoplasmic inclusions: 無inclusion優於有inclusion


http://humrep.oxfordjournals.org/content/12/8/1750.full.pdf+html

2-cell鼠胚較8-cell 鼠胚易受冷凍過程之傷害

2-cell鼠胚較8-cell 鼠胚易受冷凍過程之傷害

鼠胚分裂速度較人胚快
24h達2-4cell
48h達morula
96h達分裂囊胚

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2799565/?tool=pmcentrez

外型不佳之卵子ICSI受孕率與外型正常卵子受孕率類似

外型不佳之卵子ICSI受孕率與外型正常卵子受孕率類似

外型不佳之卵子包括:dark incorporations, dark zona pellucida, large periviteUine

space, spots, vacuoles, refractile bodies and irregular
shape.


ICSI可克服某種程度卵子之先天缺陷

尤其針對精蟲正常&IVF無法受孕&不明原因之不孕症病患
須採用ICSI克服卵子之先天缺陷

http://humrep.oxfordjournals.org/content/11/3/595.full.pdf+html

ICSI受孕失敗主因為精子無法形成原核PN

ICSI受孕失敗主因為精子無法形成原核PN
>50%ICSI受孕失敗之精子頭部並未融合於卵細胞質中




http://www.biolreprod.org/content/68/4/1341.full

以猴胚探討IVF vs ICSI 受孕過程不同分生機轉

以猴胚胎探討IVF vs ICSI 在受孕過程中
發生細胞核融合，染色體，紡錘絲聚集，呈現完全不同之分生機轉

IVF過程，精蟲頂體於接觸穿越ZP過程溶解分解
精蟲頭部與中節穿越入卵細胞質中

ICSI過程，精蟲完整打入卵細胞質中，在卵細胞內分批融解，
IVF or ICIS受孕過程最大差異在annulate lamellae之形成方式與 PN之形成

不論IVF & ICSI ，mitochondria 均伴演重要角色在annulate lamellae & PN之形成

ICSI機轉之了解有助解釋ICSI後精蟲與卵細胞無法受孕融合之原因

http://humrep.oxfordjournals.org/content/11/8/1703.full.pdf+html

玻璃化冷凍基本概念

玻璃化冷凍須解決3大問題
chemical toxicity 化學毒性
osmotic stress 滲透壓
nitrogen (LN) contamination 液態氮汙染

提高升溫降溫速度可
下降chemical濃度解決化學毒性
下降osmotic stress


最易受傷害chilling injury之溫度為25度下降至0度(dangerous zone)

---載具必以最快速度放入LN2

2-cell 胚胎最易受冷凍過程傷害

SPS封閉式載具最大缺點為升溫降溫速度比開放式較慢

http://humrep.oxfordjournals.org/content/24/4/797.full

玻璃化冷凍溫度下降或上升速度越快，胚胎存活率越高

玻璃化冷凍解凍過程為防止冰晶形成，溫度下降或上升速度高達6-100000度/min
溫度下降或上升速度越快，胚胎存活率越高

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3338624/?tool=pmcentrez

靠近ZP切片口之胚葉細胞易在冷凍過程融解

切片胚胎靠近ZP切片口之胚葉細胞較易在冷凍解凍過程融解lysis‧

玻璃化冷凍解凍法比其他傳統冷凍法存活率較高
http://humrep.oxfordjournals.org/content/20/6/1615.full

Day 3胚胎切片後培養至囊胚再冷凍解凍植入與新鮮胚胎切片後培養植入之懷孕率相近

Day 3胚胎切片後培養至囊胚再冷凍解凍植入vs新鮮胚胎切片後培養植入
懷孕率相近(22 vs 28%)
著床率較低 (14 vs 24%)

http://humrep.oxfordjournals.org/content/26/2/316.full

卵子外觀與形態與胚胎著床懷孕率有相對關聯但無絕對關聯

卵子外觀與形態與胚胎著床懷孕率有相對關聯但無絕對關聯
外觀與形態包括：

the meiotic spindle: 紡錘體: 靠近PB較佳，但無絕對關聯
zona pellucida: 中空透明帶: 較薄較佳，但無絕對關聯
Vacuoles or refractile bodies: 卵細胞質空泡:　較差，但無絕對關聯
the shape of the PB: 完整無碎片較佳，但無絕對關聯
dark cytoplasm or diffuse granulation & central granulation；卵細胞質中央顆粒:　較差，但無絕對關聯
perivitelline space: 空隙小及無雜質較佳，但無絕對關聯
the shape of oocytes 橢圓形卵:　較差，但無絕對關聯

cumulus–oocyte complex；成熟度好較佳，但無絕對關聯
cytoplasm viscosity and membrane resistance characteristics

http://humupd.oxfordjournals.org/content/17/1/34.full

原核胚胎解凍後，原核完整性與其囊胚發育率及懷孕率有關

2PN胚胎解凍後，原核(PN)完整性與其囊胚發育率及懷孕率有關

完整性PN有40%會發育到囊胚期胚胎
不完整性PN只有4%會發育到囊胚期胚胎

完整性PN發育囊胚期胚胎有43%會懷孕
不完整性PN發育囊胚期胚胎只有20%會懷孕

Z1 score的2PN胚胎解凍後有50%PN完整性
Z2,3score的2PN胚胎解凍後有1-20%PN完整性

結論: 解凍後原核核膜及核仁越清晰，胚胎品質越佳
http://humrep.oxfordjournals.org/content/23/4/819.full

長效型比短效型腦下垂體抑制劑需較高劑量FSH

長效型vs短效型腦下垂體抑制劑GnRHa
二者臨床效果(PR, oocyte No.)類似
長效型GnRHa需較高劑量之FSH

卵子體外成熟培養(IVM)重要概念

IVM對象多為PCO

IVM 培養液含75 mIU/mL FSHH & 75 mIU/mL LH


IVM取卵用19g取卵針


pump壓力要調低


micro-TESE 傷口小 切片小，應優於open MESA


IVM卵優先用ICSI


IVM卵子成熟率30%


IVM成熟卵子ICSI懷孕率40-50%


卵泡至少要>6mm才可能IVM


卵泡>9mm， IVM成功率較高



http://www.andrologyjournal.org/cgi/content/full/32/1/23

體外胚胎成熟培養(IVM)重要概念

體外卵子成熟培養(IVM)的cases, 取卵時機應為hCG打後38h (而非35h)

IVM主要對象為PCO

取卵時機約最大卵泡達1-1.4cm

<10mm之卵泡也有可能取出成熟MII卵子

IVM療程通常不施打排卵針FSH

IVM卵子優先使用ICSI受孕，比IVF受孕率高

IVM培養約24-48h
IVM成熟率約60-70%
IVM懷孕率約10-20%
IVM著床率約5-10%

http://humupd.oxfordjournals.org/content/16/6/675.full

用micro-needle穿刺blastocoele造成shrinkage後再冷凍囊胚

Blastocoele越大，內含大量水份，容易產生ice crystal，冷凍效果越差

本研究使用micro-needle穿刺blastocoele造成shrinkage後再冷凍

http://humrep.oxfordjournals.org/content/17/3/744.full

反覆pipette囊胚導致blastocoele排出再玻璃化冷凍

使用140um pipette反覆抽吸囊胚導致囊胚之blastocoele破裂排出後再玻璃化冷凍
解凍後培養3h以達re-expansion
3-5h後植入
解凍後存活率96%
植入懷孕率50%, 著床率33%
缺點: pipetteing 時間過久，需4-10min

http://humrep.oxfordjournals.org/content/19/12/2884.long